湖北利川及邻区产黄连的质量评价

钟一文 万定荣 吴漫 唐吉慧 徐泽刚 刘虹

（1.中南民族大学药学院 湖北 武汉 430074；
2.湖北省利川市箭竹溪黄连专业合作社；
3.中南民族大学生命科学学院）

中药材黄连是毛茛科植物黄连（Coptis chinensis Franch.）、三角叶黄连（Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao）或云连（Coptis teeta Wall.）的干燥根茎。以上3种基源的黄连分别习称“味连”“雅连”“云连”，其中“味连”是黄连的主要商品，主产于湖北利川和重庆石柱。该两大产区均有“黄连之乡”之称，合计产量占全国黄连产量的80%以上。重庆石柱县拥有全国最大的黄连交易市场。利川与石柱同处武陵山脉，种植的黄连也为同一基源，两地虽归属不同省市，但互为邻区，自然条件、生态环境都十分相似[1]。在历史上，利川在春秋时属巴国，后又归古“四川”管辖，其所产黄连与石柱黄连统称川黄连[2]。许多利川黄连的生产商为了迎合市场，将利川黄连运到重庆石柱[3]，对外以“石柱黄连”的名义进行销售，故有必要对利川黄连和石柱黄连的质量进行评价研究。

小檗碱、巴马汀、表小檗碱、黄连碱等生物碱类成分是黄连的主要有效活性成分，本文主要分析利川黄连与石柱黄连中这4种生物碱的含量，对两者的质量状况进行初步研究[4-8]。

2.1 实验材料

利川黄连不同产地样品（5份）由湖北利川市箭竹溪黄连专业合作社的徐泽刚收集；
重庆石柱黄连（3份）由重庆石柱县枫木乡莲花村的刘学生采集。样品收集地点信息见表1。

表1 样品采集点信息

2.2 仪器

高效液相色谱仪（戴安3000，在线脱气机、二元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器、Chromeleon色谱工作站）；
电子天平（BP211D型，德国）；
超声波清洗器（KQ-500E型，昆山市超声仪器有限公司）；
0.45 μm微孔滤膜（天津津腾实验设备有限公司）；
色谱柱（HypersilC18（250 mm×4.6 mm，5 μm））；
万分之一分析天平（CP214，奥豪斯仪器有限公司）。

2.3 试药

甲醇（分析纯）、磷酸（优级纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、十二烷基硫酸钠（化学纯）（国药集团化学试剂有限公司）；
乙腈（色谱纯）（西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司）；
小檗碱对照品（归一化法检测其纯度为98.7%）；
表小檗碱对照品（归一化法检测其纯度为98.88%）；
巴马汀对照品（归一化法检测其纯度为98.53%）；
黄连碱对照品（归一化法检测其纯度为98.17%）（上海源叶生物科技有限公司）；
实验用水为超纯水。

3.1 混合对照品溶液的制备

精密称取表小檗碱对照品、巴马汀对照品、黄连碱对照品和小檗碱对照品适量，均加入甲醇，分别制成每1 mL含表小檗碱53.3 μg、巴马汀33.3 μg、黄连碱40.0 μg和小檗碱33.3 μg的混合对照品溶液。

3.2 供试品溶液制备

取各样品粉末（过2号筛）约0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中；
精密加入甲醇-盐酸（100∶1）的混合溶液50 mL，密塞；
称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min；
放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；
精密量取续滤液2 mL，置于10 ml量瓶中；
加入甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3 色谱条件

采用HPLC色谱法测定。填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相：乙腈-0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液（50∶50）（每100 ml中加十二烷基硫酸钠0.4 g，再以磷酸调节pH值为4.0）；
检测波长：345 nm；
流速：1 mL/min；
柱温：30℃；
进样量：10 μL。理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算，不低于5 000。

混合对照品溶液色谱图见图1，代表性样品利川市汪营镇黄连样品色谱图见图2，石柱县沙子镇沙子村黄连样品色谱图见图3。

图1 混合对照品溶液HPLC色谱图

图2 利川汪营镇黄连样品HPLC色谱图

图3 石柱沙子镇沙子村黄连样品HPLC色谱图

3.4 标准曲线

配制表小檗碱对照品溶液系列浓度（μg/mL）为10.6、21.2、42.4、84.8、169.6、339.2，采用高效液相色谱法，在波长345 nm处分别测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标（Y），对照品溶液的浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。计算得回归方程：Y=0.0205X+0.0094（r2=0.999 4），表明在10.6～339.2 μg/mL范围内，小檗碱浓度与峰面积呈良好的线性关系。

配制黄连碱对照品溶液系列浓度（μg/mL）为4.0、8.0、16.0、32.0、64.0、128.0，采用高效液相色谱法，在波长345 nm处分别测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标（Y），对照品溶液的浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。计算得回归方程：Y=0.0221X+0.007（r2=0.999 8），表明在4.0～128.0 μg/mL范围内，黄连碱浓度与峰面积呈良好的线性关系。

配制小檗碱对照品溶液系列浓度（μg/mL）为8.7、17.4、34.8、69.6、139.2、278.4，采用高效液相色谱法，在波长345 nm处分别测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标（Y），对照品溶液的浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。计算得回归方程：Y=0.0204X+0.0037（r2=0.999 8），表明在8.7～278.4 μg/mL范围内，小檗碱浓度与峰面积呈良好的线性关系。

配制巴马汀对照品溶液系列浓度（μg/mL）为8.7、17.4、34.8、69.6、139.2、278.4，采用高效液相色谱法，在波长345 nm处分别测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标（Y），对照品溶液的浓度为横坐标（X），绘制标准曲线。计算得回归方程：Y=0.0235X+0.0015（r2=0.999 8），表明在8.7～278.4 μg/mL范围内，巴马汀浓度与峰面积呈良好的线性关系。

3.5 精密度考察

取2号供试品溶液在“3.3”项色谱条件下连续进样6次，测定峰面积。结果显示，小檗碱、巴马汀、表小檗碱、黄连碱峰面积的RSD依次为0.33%、0.52%、0.25%和1.21%，表明仪器的精密度良好。

3.6 重复性实验

精密称取2号黄连样品粗粉0.2 g共6份，按照前述方法分别制备供试品溶液，依法进样，分别记录小檗碱、巴马汀、表小檗碱、黄连碱的峰面积。结果显示，峰面积的RSD依次为0.80%、1.19%、1.03%和1.95%，表明测定结果的重复性良好。

3.7 稳定性试验

精密称取2号黄连样品粗粉0.2 g，按照前述方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、24 h进样，分别记录小檗碱、巴马汀、表小檗碱、黄连碱的峰面积。结果显示，峰面积的RSD依次为0.64%、0.93%、1.27%和1.26%，表明黄连供试品溶液中各有关成分的含量在24 h内稳定。

3.8 加样回收率试验

精密称取2号黄连样品粗粉0.2 g，共6份，分别加入与样品中各成分量等量的对照品，按照前述方法制备供试品溶液并进样分析，计算回收率。结果显示，小檗碱、巴马汀、表小檗碱、黄连碱的平均回收率分别为104.41%、98.33%、100.54%和101.17%，表明样品中各成分测定的准确度高。

按照上述方法对不同产地的黄连样品进行4种生物碱含量的测定，检测结果均按干燥品计，检测数据见表2。

表2 不同产地的黄连样品有关物质的含量测定结果

由表中检测数据可知，8批黄连样品中小檗碱含量为7.91%～9.72%，均高于中国药典规定最低5.5%的含量限度；
黄连碱含量为2.40%～2.94%，均高于中国药典规定最低1.6%的含量限度；
巴马汀含量为1.85%～2.73%，均高于中国药典规定最低1.5%的含量限度；
表小檗碱含量为1.52%～2.12%，均高于中国药典规定最低0.80%的含量限度。说明产于湖北利川及重庆石柱的黄连质量均为良好。

湖北利川黄连5个地区的小檗碱、巴马汀、表小檗碱的平均含量分别为8.83%、2.44%和1.90%，明显高于重庆石柱黄连3个地区的平均含量8.25%、1.94%和1.65%，但利川黄连黄连碱含量为2.59%，低于石柱黄连黄连碱含量2.73%。按含量最高的主要生物碱成分小檗碱以及黄连碱、巴马汀、表小檗碱三者的总量平均值来看，湖北利川黄连的平均含量分布为8.83%和6.93%，显著高于重庆石柱的8.25%和6.31%，说明利川黄连的品质在总体上优于重庆石柱黄连。

利川市汪营镇黄连样品小檗碱、巴马汀、表小檗碱3种生物碱的含量分别为9.72%、2.73%和2.12%，均为最高。利川市建南镇箭竹溪黄连样品小檗碱、巴马汀、表小檗碱3种生物碱的含量分别为9.50%、2.59%和1.95%，仅次于利川市汪营镇黄连样品。石柱县枫木镇昌平村黄连样品中小檗碱含量为7.91%，且黄连碱、巴马汀、表小檗碱三者的生物碱含量总值为5.97%，均为最低。利川黄连在性状上普遍成鸡爪状，抱团成簇，团簇直径较大，单枝粗细较均匀，而石柱黄连抱团略松散，单枝多较细较短。

湖北利川5个地点黄连样品的生物碱含量平均值显著高于重庆石柱3个地点黄连样品的平均值，初步推断湖北利川黄连的质量略优于重庆石柱黄连。

根据样品收集者提供的信息，湖北利川汪营、箭竹溪及重庆石柱县沙子乡的黄连样品生长期为6年，其余为5年，根据检测数据可知，生长6年者生物碱类成分含量较高，质量优于生长5年者，这一结论已有同类文献的支持[9]。另有文献记载，“味连”宜产地域覆盖利川各乡镇和石柱黄水镇（石柱黄连最集中地区），根据《原产地域产品保护规定》和《地理标志产品保护规定》，原国家质量监督检验检疫总局分别于2004年10月10日、2004年12月23日，宣布对石柱黄连和利川黄连实施国家地理标志产品保护[10]，说明利川和石柱均为我国黄连（味连）传统特色产区。但利川黄连品质优异，其药材运至重庆市石柱县黄水镇作“石柱黄连”销售并不适宜，不仅造成人力物力资源的浪费，也影响利川黄连的品牌建设。

此外，因为各黄连采集地的海拔高度差别不大，因此本文无法分析出海拔高度对黄连生物碱含量是否有直接影响。

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